Nativni isoelektricka fokusace

Gel 8 x 7 cm, sila 1.5 mm.

Slozeni gelu:

• 7 ml H₂O
• 2 ml akrylamid/bis-akrylamid (30:1)
• 2.4 ml 50% (v/v) glycerolu
• 0.6 ml smesi amfolitu (pH 3-10)

Smichat, pote pridat 50 ul 10% persulfatu amon. a 20 ul TEMEDu. Vlozit hreben a nechat 1 h polymerovat.

Roztoky pro elektroforesu:

• Katolyt: 25 mM NaOH (0.2 g / 200 ml)
• Anolyt: 20 mM kyselina octova (1.14 ml koncentrovane do 1 l)
• Pred ELFO ochladit na 4 °C!!!

Priprava standardu:

Standardy smichat se stejnym objemem roztoku 60% (v/v) glycerolu a 4% (v/v) amfolytu (stejne pH jako pro pripravu gelu).

Elektroforesa:

Pri RT, 1.5 hod. U=200 V, pote dalsi 1.5 hod. pri U=400 V. I ~ 10 mA.